La genotipificació i el fenotip poden identificar i, fins i tot, predir, la resistència als fàrmacs del VIH
Fins i tot per a les persones amb una adherència òptima a la teràpia, s'espera que un cert grau de resistència als medicaments contra el VIH es desenvolupi al llarg del temps a causa de mutacions naturals del virus. En altres casos, la resistència pot desenvolupar-se ràpidament quan la adherència subòptima permet que les poblacions resistents de VIH prosperin, i eventualment es produeixin fracassos en el tractament.
Quan es produeixi un fracàs del tractament, s'han de seleccionar combinacions alternatives de medicaments per eliminar aquesta nova població de virus resistents.
Les proves de resistència genètica ajuden a facilitar-ho identificant els tipus de mutacions resistents a la "piscina viral" d'una persona, tot descobrint com són susceptibles aquests virus a possibles agents antiretrovirals .
S'utilitzen dues eines primàries per a la prova de resistència genètica en VIH: l' assaig genotípic del VIH i l' assaig fenotípic del VIH .
Què és un genotip i un fenotip?
Per definició, un genotip és simplement la composició genètica d'un organisme, mentre que un fenotip és les característiques o trets observables d'aquest organisme.
Els assaigs genotípics (o el genotipatge) funcionen identificant les instruccions heretats en la codificació genètica d'una cèl·lula, o l'ADN. Els assaigs fenotípics (o fenotips) confirmen l'expressió d'aquestes instruccions sota la influència de diferents condicions ambientals.
Tot i que l'associació entre el genotip i el fenotip no és absolut, el genotipatge sovint pot ser predictiu del fenotip, particularment quan els canvis en el codi genètic confereixen als canvis esperats els trets o les característiques, com en el cas del desenvolupament de la resistència als medicaments.
El fenotip, d'altra banda, confirma el "aquí i ara". El seu objectiu és avaluar la reacció d'un organisme a canvis específics en la pressió ambiental, com quan el VIH està exposat a diferents medicaments i / o concentracions de fàrmacs.
Explicar el genotipatge del VIH
El genotipatge del VIH generalment és la tecnologia més freqüent utilitzada per a la prova de resistència.
L'objectiu de l'assaig és detectar mutacions genètiques específiques a la regió gag-pol del genoma del virus (o codi genètic). Aquesta és la regió on la transcriptasa inversa, la proteasa i la integrase enzims -els objectius de la majoria dels fàrmacs antiretrovirals- estan codificats en la cadena d'ADN.
En primer lloc amplificar el genoma del VIH mitjançant tecnologia de reacció en cadena de la polimerasa (PCR) , els tècnics de laboratori poden ordenar (o "mapear") la genètica del virus utilitzant diverses tecnologies de detecció de mutacions.
Les tesis mutacions (o acumulació de mutacions) són interpretades per tècnics que analitzen la relació entre les mutacions identificades i la susceptibilitat esperada del virus a diferents fàrmacs antiretrovirals. Les bases de dades en línia poden ajudar comparant la seqüència de prova amb la d'un prototip de virus de tipus "salvatge" (és a dir, el VIH que no conté mutacions resistents).
La interpretació d'aquestes proves s'utilitza per determinar la susceptibilitat dels fàrmacs, amb la major quantitat de mutacions clau que confereixen a nivells més alts de resistència als fàrmacs .
Explicació del fenomen del VIH
El fenotip del VIH avalua el creixement del VIH de la persona en presència d'un fàrmac i, a continuació, es compara amb el creixement d'un virus controlat de tipus salvatge en el mateix fàrmac.
Igual que amb els assajos genotípics, les proves fenotípicas amplifiquen la regió gag-pol del genoma del VIH.
Aquesta secció del codi genètic és llavors "injertada" en un clon de tipus salvatge que utilitza la tecnologia d'ADN recombinant . El virus recombinant resultant s'utilitza per infectar les cèl·lules de mamífer in vitro (al laboratori).
La mostra viral queda exposada a concentracions creixents de diferents fàrmacs antiretrovirals fins a aconseguir un 50% i un 90% de supressió viral. Les concentracions es comparen amb els resultats del control, mostra de tipus salvatge.
Els canvis relatius de "plegar" proporcionen el rang de valors pel qual es determina la susceptibilitat del fàrmac. Un canvi de quatre vegades significa que quatre vegades es necessita la quantitat de fàrmacs per aconseguir la supressió viral en comparació amb la del tipus salvatge.
Com més gran sigui el valor de la plegada, menys se suposa que el virus és per a un medicament específic.
Aquests valors es col·loquen en rangs clínics baixos i clínics superiors, amb valors superiors que confereixen a nivells més alts de resistència al medicament. (Vegeu l' informe de mostra ).
Quan es realitza una prova de resistència genètica?
Als Estats Units, les proves de resistència genètica es realitzen tradicionalment en pacients ingestes per determinar si tenen alguna resistència a medicaments "adquirits". Els estudis als EUA suggereixen que entre el 6% i el 16% del virus transmès serà resistent a almenys un medicament antiretroviral, mentre que prop del 5% serà resistent a més d'una classe de fàrmac.
Les proves de resistència genètica també s'utilitzen quan se sospita la resistència a medicaments en individus amb teràpia. Les proves es realitzen mentre el pacient pren el règim fallit o en quatre setmanes després de la suspensió del tractament si la càrrega viral és superior a 500 còpies / mL. Les proves genotípicas generalment es prefereixen en aquests casos, ja que costen menys, tenen un temps de resposta més ràpid i ofereixen una major sensibilitat per detectar barreges de virus salvatges i resistents.
En general, es prefereix una combinació de proves fenotípicas i genotípicas per a persones amb resistència complexa i multidroga, especialment per a aquells que estan exposats a inhibidors de la proteasa .
Fonts:
Organització Mundial de la Salut (OMS). "Full de dades sobre la resistència als fàrmacs per VIH". Ginebra, Suïssa; 11 d'abril de 2011.
Kim, D .; Ziebell, R .; Saduvala, N .; et al. "Tendència en les mutacions associades a la resistència a medicaments ARV del VIH-1 transmeses: 10 zones de vigilància del VIH, EUA, 2007-2010". XX Conferència sobre retrovirus i infeccions oportunistes. Atlanta, Geòrgia; 6 de març de 2013; Resum oral 149.
Instituts Nacionals de Salut (NIH). "Directrius per a l'ús d'agents antiretrovirals en adults i adolescents infectats pel VIH-1". Bethesda, Maryland; 11 d'octubre de 2013.