Què és l'anàlisi de PCR?
L'anàlisi de la reacció en cadena de la polimerasa (PCR) és una tècnica de laboratori dissenyada per identificar petites quantitats d'ADN en una mostra mitjançant un procés conegut com a amplificació . Durant l'amplificació de PCR, el DNA d'interès es copia repetidament fins que n'hi ha prou d'anàlisi i detecció. Per exemple, la PCR es pot utilitzar per identificar petites quantitats d'ADN dels organismes que causen gonorrea o clamídia presents en una mostra d'orina .
Com funciona PCR?
El primer pas en PCR és escalfar la mostra de manera que l'ADN de doble cadena es separi en dos fils simples: això es denomina desnaturalització . A continuació, els primers , mostres curtes d'ADN que coincideixen fins als extrems de la seqüència d'ADN d'interès, es combinen amb l'ADN de la mostra. Després d'això, s'utilitza una ADN polimerasa per iniciar la replicació de l'ADN a la ubicació del primer. Finalment, l'ADN s'escalfa per separar els fils una vegada més, i tot el procés de PCR comença de nou.
La quantitat del segment d'interès d'ADN present a la mostra augmenta exponencialment amb cada cicle de PCR: una còpia es converteix en dos, es converteix en quatre, es converteix en vuit, etc. en general, només es necessiten 20 a 40 cicles per determinar si el DNA en qüestió està present (i, si és així, proporcionar una mostra suficient per a l'anàlisi).
Tots els passos d'una reacció en cadena de la polimerasa -desnaturalitzar l'ADN, aplicar els cebadors i allargar l'ADN- passen a diferents temperatures, de manera que després de la combinació inicial, es poden controlar els passos a través d'un procés anomenat termociclatge , en què la temperatura es manté en els nivells necessaris pel temps suficient per a cada pas.
Per tant, la PCR és una forma eficaç d'amplificar la quantitat de DNA objectiu en un sol tub d'assaig amb poca necessitat d'intervenció humana.
La reacció en cadena de la polimerasa representava una revolució en la tècnica biològica quan es va desenvolupar per primera vegada a principis dels vuitanta, i el creador de la PCR, Kary Mullis, va guanyar el Premi Nobel de Química per al seu treball el 1993.
Per què és rellevant la PCR per a la prova d'ETS?
La reacció en cadena de la polimerasa i les tècniques relacionades, com la reacció en cadena de la ligasa , estan demostrant ser de més importància per a les proves d'ETS. Això és degut a que aquestes tècniques poden identificar directament petites quantitats d'ADN viral o ARN en mostres. Identificar el codi genètic d'un patogen no requereix que el patogen estigui viu, com ara el cultiu bacterià o la cultura viral . A més, no requereix que la infecció s'hagi produït fa temps suficient perquè les persones hagin desenvolupat una reacció detectada d'anticossos (com la detecta ELISA ). Això significa que les tècniques de PCR a vegades poden detectar malalties abans que altres proves, i sense tant cal preocupar-se de mantenir vives les mostres o provar exactament en el moment adequat.